蜂蜜中氯霉素的检测说明

•  氯霉素检测：

　　目前的氯霉素等抗生素快速检测，主要有酶联免疫法（ELISA）和胶体金免疫层析法。
　　胶体金法的特点是快速、简单，无需实验室器材和专业的操作人员，前处理简单，结果直观，常温保存。国内有很多的厂家均有生产，比如上海快灵，北京六角体等。现已广泛应用于国内各大企业。
　　胶体金法只需将处理好的样品加入稀释液，搅拌均匀，将混合好的检测液滴入检测卡中，5~10分钟即可根据卡上的出线情况判读结果。
　　ELISA法反应原理 
　　主要是利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的基本原理来进行的。在整个反应当中,样品中氯霉素含量越多，反应呈色就越淡。反之，样品中氯霉素含量越少，则呈色越深。 
　　试剂盒组成 
　　1、微量测试孔：每条8孔，每板12条 
　　2、氯霉素标准溶液： 
　　0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb，1.5ml/瓶 
　　3、10倍浓缩萃取稀释液：一瓶，30ml/瓶 
　　4、10倍浓缩洗涤液：一瓶，30 ml /瓶 
　　5、氯霉素酶标记物： 一瓶，8 ml/瓶 
　　6、底物溶液：一瓶，12 ml/瓶 
　　7、反应终止液：一瓶，13 ml/瓶 
　　使用说明 
　　A、注意事项 
　　1、使用前先将氯霉素标准溶液6瓶，浓缩萃取稀释液，浓缩洗涤液，酶标记物，底物溶液及微量测试孔条置于室温下，回温30分钟。 
　　2、原倍萃取稀释液及洗涤液配制 
　　用蒸馏水将10倍浓缩萃取稀释液及浓缩洗涤液分别以1： 9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水)，即可作为样品萃取稀释液与微孔板清洗液。 
　　3、回温后，取出所需微量测试孔条，将剩余板条立即放回铝箔袋中用胶带封好，置于4o℃保存。 
　　B、样品制备 
　　1.待测物为生乳，则依以下方法进行处理 (5倍稀释) 
　　取100ul待测生乳加入400ul萃取稀释液，振荡混合后备用。 
　　2.待测物为蜂蜜，则依以下方法进行处理 
　　a.取2g蜂蜜、4ml蒸馏水与2ml 乙酸乙酯置入离心管中，震荡约5分钟，使其充分混合均匀。 
　　b.离心10分钟(3000rpm)，取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50℃下氮气吹干(温度请勿超过50oC)。 
　　c.加入0.5ml萃取稀释液，震荡约10秒钟后备用。 
　　3. 待测物为血清、则依以下方法进行处理 
　　a.抽取待检动物血液，离心或静置取其较透明之上层液(血清层)使用，注意不要有溶血。 
　　b.将3ml血清加入离心管中，再加入6ml乙酸乙酯，震荡混合约30秒。 
　　c.离心10分钟(3000rpm)，取2ml上层液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮气吹干。 
　　d.于此玻璃管中加入正己烷2ml，先将残余物*溶解后，再加入1 ml萃取稀释液，震荡约30秒钟。 
　　e. 离心10分钟(3000 rpm)，用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分，弃掉。再吸取下层液(水层)备用。 
　　f.若有乳化现象，请先将大部分上层液(正己烷)取出后，再将玻璃管置入80oC水中，隔水加热约5~10分钟，可改善乳化情形。 
　　4. 待测物为鸡肉或鱼、虾，则依以下方法进行处理 
　　a.将3克样品剪碎后放入50 ml离心管中，再加入6ml乙酸乙酯，并以均质机均质约1分钟，再震荡约30秒。 
　　b.离心10分钟(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮气吹干。 
　　c.于此玻璃管中加入正己烷2 ml，先将残余物*溶解后(若未能*溶解，可能会导致回收率降低)，再加入1 ml萃取稀释液，震荡约30秒钟。 
　　d.离心10分钟(3000 rpm)，用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分，弃掉。再吸取下层液(水层)备用。 
　　e.若有乳化现象，请先将大部分上层液(正己烷)取出后，再将玻璃管置入80oC水中，隔水加热约5~10分钟，可改善乳化情形。待测物为血清、则依以下方法进行处理 
　　5.待测物为内脏(肝、心等)，则依以下方法进行处理(5倍稀释) 
　　同上述步骤a~d，但下层液吸出后，再以萃取稀释液稀释5倍(即下层液50ul加萃取稀释液200ml)。 
　　6.待测物为饲料，则依以下方法进行处理(10倍稀释) 
　　同上述步骤a~d，但下层液吸出后，再以萃取稀释液稀释10倍(即下层液30ul加萃取稀释液270ml)。 
　　C、操作步骤 
　　本产品的酶标记物与氯霉素标准溶液均直接使用，无需再稀释。 
　　1、于适当微孔中分别加入100mL标准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。 
　　2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前处理的样品溶液。 
　　3、再于每一微孔中另再加入50mL酶标记物。 
　　4、轻敲盘子四周，使其充分混合后于室温下避光静置温育1小时。 
　　5、将微孔中的反应液甩掉，再将洗液加满每一微孔后甩掉，重复洗3次。 
　　6、zui后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。 
　　7、于每一微孔中加入底物溶液100mL后，轻敲盘子四周，使其充分混合。 
　　8、于室温下避光静置温育20分钟。 
　　9、于每一微孔中加入100mL反应终止液。 
　　10、用酶标仪于波长450nm下判读。 
　　D、判定 
　　1. 计算B/B0值。用样品或标准液吸光度值(B)除以零标准吸光度值(B0)再乘以100%。 
　　2. 以B/B0值为纵坐标，以标样浓度的对数值为横坐标，做标准半对数曲线。 
　　3. 根据每个样品的B/B0值就可从曲线上读出相对应样品的浓度。 
　　4. 由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。 
　　E、标准曲线 
　　F、灵敏度 
　　氯霉素试剂检测盒的平均检测下限为 0.05ppb，此浓度之吸光值与阴性标准溶液(0ppb)之吸光值有明显的差异。 
　　G、 特异性 
　　针对以下抗生素进行交叉反应之测试，结果如下： 
　　Chloramphenicol =100% 
　　Chloramphenicol(free base) <0.1% 
　　Gentamycin <0.1% 
　　Tetracycline <0.1% 
　　Penicillin G <0.1% 
　　Sulfamethazine <0.1% 
　　H、再现性 
　　针对氯霉素检测试剂盒精密度测试，重复6次，所得不同浓度标准溶液的吸光值变异系数(%CV).
　　I、回收率 
　　生乳(添加1.0ppb)104~117% 
　　蜂蜜(添加0.3ppb)90~110% 
　　虾及鱼肉(添加0.5ppb)95~110% 
　　鸡肉(添加0.5ppb) 90~120% 
　　血清(添加0.5ppb)100~120% 
　　内脏(添加1.0ppb) 100~120% 
　　饲料(添加2.0ppb)80~110% 
　　氯霉素检测试剂盒 
　　简介 
　　氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素。由于其具有效果好以及价格低廉等优点，目前已被普遍应用于各类家禽、家畜、水产品及蜂制品的各种传染性疾病的治疗。然而氯霉素有其严重的副作用,它会抑制人体骨髓的造血功能，从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。目前，我国已禁止其使用。 
　　简化了样品处理方式，使用简便，省时省力省钱，整个操作过程不到90分钟。本产品检测范围广(鸡肉、鱼、虾、蟹、牛奶、血清、肌肉、组织、饲料与蜂蜜等)，回收率为80%－120%，灵敏度可达到0.05ppb. 
　　简单 
　　1． 样品提取方便快捷。 
　　2． 90分钟得到结果。 
　　3． 只需基本的实验室设备。 
　　4． 操作人员只需zui基本的实验知识。 
　　准确 
　　1． 结果重现性高。 
　　2． 至0.05ppb。 
　　3． 与其它抗体的交叉反应率极低。 
　　产品规格 
　　包装：每包96孔 
　　灵敏度: 0.05ppb 
　　测试区间：0.05ppb－4.05ppb 
　　检测时间：80分钟(提取后) 
　　储存条件：2-8℃
　　氯霉素快速检测试纸（48条/盒） 型号:DP1 
　　氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素。由于其具有效果好以及价格低廉等优点，目前已被普遍应用于各类家禽、家畜、水产品及蜂制品的各种传染性疾病的治疗。然而氯霉素有其严重的副作用,它会抑制人体骨髓的造血功能，从而引起再生障碍性贫血和粒细胞缺乏症。目前，我国已禁止其使用。 
　　氯霉素检测试纸，简化了样品处理方式，使用简便，,整个操作过程只须15分钟。灵敏度可达到3ppb
　　其原理为：在试剂片的 ‘中央判读区’喷有2条隐形的线,上面一条为对照线(C线)，下面一条为测试线(T线)。若样品中氯霉素的浓度小于3ppb，则T线呈色与C线相近；若样品中氯霉素的浓度大于3ppb，则T线将比C线浅很多或*看不到线，也就是说，氯霉素浓度越高T线越浅。 
　　简单：
　　1． 成套的装置，提供准确一致的可视的结果
　　2． 适于现场检测。15分钟得到结果。
　　3． 操作人员只需zui基本的化验知识。
　　准确：
　　1． 结果重现性高。
　　2． 至3ppb。
　　3． 与其它抗体的交叉反应率极低 
　　：
　　我们为用户提供zui方便、快捷、周到的服务。 
　　产品规格
　　包装：每包16片
　　灵敏度: 3ppb
　　检测时间：15分钟(提取后)
　　储存条件：2-8℃ 
　　组成 
　　本试纸组可进行16次实验 
　　1、反应孔:2条16孔
　　2、氯霉素指示剂：1瓶 
　　3、检测试纸片一筒 ：16片 
　　4、小吸管：24支 
　　5、样品混合棒：20根 
　　6、10倍浓缩稀释缓冲液：1瓶 
　　试纸使用说明： 
　　A、注意事项 
　　1、 试纸需要干燥保存，请随时确保瓶盖盖严 
　　2、 测试环境温度>20℃即可。 
　　3、尽量不要触摸试纸片中央在白色膜面。 
　　4、本试纸使用前，需先将整套组成部分在室温中回温30分钟，以确保反应的正确性。 
　　5、检测一个样品使用一个反应孔，一片测试片及一支滴管。未用完的氯霉素指示剂，可放回4℃冰箱留待下次再用。未用过的微量测试孔，隔次仍可使用。 
　　6、结块或发臭的牛奶不适合检测。 
　　7、原倍稀释缓冲液配制：用蒸馏水将10倍浓缩稀释缓冲液以1:9的比例稀释(即1mL浓缩液+9mL蒸馏水)，即可作为样品稀释液。 
　　B、样品制备： 1.待测物为牛奶可直接进行检测。 
　　2.待测物为蜂蜜，则依以下方法进行处理： 
　　以金属勺取少量待测蜂蜜样品置于火上加热至沸腾，用小细管趁热吸取样品（勿吸入气泡），以稀释缓冲液做1：3稀释。 
　　3. 待测物为血清、则依以下方法进行处理： 
　　a.抽取待验动物血液，离心或静置取其较透明之上层液(血清层)使用，注意不要有溶血。 
　　b将3ml血清加入离心管中，再加入6 ml乙酸乙酯，震荡混合约30秒。 
　　c.离心10分钟(3000rpm)，取2ml上层液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮气吹干。 
　　d.于此玻璃管中加入正己烷2ml，先将残余物*溶解后，再加入1 ml 稀释缓冲液，震荡约30秒钟。 
　　e. 离心10分钟(3000 rpm)，用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分，弃掉。再吸取下层液(水层)备用。 
　　f.若有乳化现象，请先将大部分上层液(正己烷)取出后，再将玻璃管置入80oC水中，隔水加热约5～10分钟，可改善乳化情形。 
　　4. 待测物为鸡肉或鱼、虾，则依以下方法进行处理： 
　　a.将3克样品剪碎后放入50 ml离心管中，再加入6 ml乙酸乙酯，并以均质机均质约1分钟，再震荡约30秒。 
　　b.离心10分钟(3000rpm)，取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中，于50oC下氮气吹干。 
　　c.于此玻璃管中加入正己烷2ml，先将残余物*溶解后(若未能*溶解，可能会导致回收率降低)，再加入1ml稀释缓冲液，震荡约30秒钟。 
　　d.离心10分钟(3000 rpm)，用吸管吸去上层液(正己烷) 及中间乳化层部分，弃掉。再吸取下层液(水层)备用。 
　　e.若有乳化现象，请先将大部分上层液(正己烷)取出后，再将玻璃管置入80oC水中，隔水加热约5~10分钟，可改善乳化情形。 
　　5.待测物为内脏(肝、心等)，则依以下方法进行处理(5倍稀释)： 
　　同上述步骤a～d，但下层液吸出后，再以稀释缓冲液稀释5倍(即下层液100μl加 稀释 缓冲液400ul)。 
　　6.待测物为饲料，则依以下方法进行处理(10倍稀释)： 
　　同上述步骤a～d，但下层液吸出后，再以稀释缓冲液稀释10倍(即下层液100μl加 稀释 缓冲液900ul)。 
　　C、操作步骤： 
　　(若样品不只一份，请先为样品及反应孔做好对应编号) 
　　1.以小吸管在微量测试孔中依次加入两滴待测的样品（以小吸管吸取时，须将*滴滴除后，再进行实验步骤）。 
　　2.充分摇匀氯霉素指示剂，以新的滴管吸取氯霉素指示剂，滴去前两滴，加入一滴指示剂于待测样品的测试孔。 
　　3.以手轻轻握住微孔，贴着桌面震荡使其混合均匀约5分钟。 
　　4.于每个测试孔中放入试纸片（白色端在下）。 
　　5.静置10分钟后判读结果（判读结果时间不要超过20分钟）。 
　　D、判读： 
　　(由于样品经过了预先稀释，因此所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数) 
　　情形1—T线比C线深，或一样深，表示样品中氯霉素浓度低于3ppb。 
　　情形2—T线比C线淡，表示样品中氯霉素浓度高于3ppb。 
　　情形3—若C线*没出现，则表示测试失败。